液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS）是目前檢測(cè)植物內(nèi)源激素最靈敏、特異且強(qiáng)大的技術(shù)之一，其在植物激素檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：
高靈敏度與特異性：LC-MS/MS能夠檢測(cè)到極低濃度（達(dá)到pg/mL至fg/mL級(jí)別）的植物激素，且由于質(zhì)譜的高分辨能力和選擇性，能夠有效區(qū)分結(jié)構(gòu)相似的激素及其代謝物，減少假陽(yáng)性結(jié)果，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
多目標(biāo)同時(shí)檢測(cè)：串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)允許在一次分析中同時(shí)測(cè)定多種植物激素，大大提高了分析效率，這對(duì)于研究激素間的相互作用和整體調(diào)控機(jī)制尤為重要。
樣品適用范圍廣：LC-MS/MS方法適用于各種植物樣本，包括葉片、根、種子、果實(shí)等，甚至是微小或難以處理的樣本，如單個(gè)細(xì)胞或特定組織區(qū)域，這為深入研究激素的空間分布和動(dòng)態(tài)變化提供了可能。
定量分析精確：通過(guò)內(nèi)標(biāo)法或同位素標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)品，LC-MS/MS能夠?qū)崿F(xiàn)植物激素的絕對(duì)或相對(duì)定量，為植物生理學(xué)研究、作物改良及環(huán)境響應(yīng)機(jī)制分析提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)支持。
自動(dòng)化程度高：現(xiàn)代LC-MS/MS系統(tǒng)高度自動(dòng)化，從進(jìn)樣、分離、檢測(cè)到數(shù)據(jù)分析都可以自動(dòng)完成，減少了人為誤差，提高了分析的重現(xiàn)性。
流程概述
樣品收集與保存
·首先，需從植物中收集目標(biāo)組織或器官，如葉片、根、莖、花或果實(shí)。收集后立即冷凍保存，通常在-80°C條件下，以防止內(nèi)源激素的降解或代謝變化。
樣品前處理
·勻漿與提取：將冷凍樣品進(jìn)行快速研磨，隨后加入提取溶劑（如甲醇、乙腈或含水的有機(jī)溶劑），通過(guò)渦旋或超聲波輔助提取內(nèi)源激素。
·凈化與濃縮：提取液需要通過(guò)固相萃?。?/span>SPE）或其他凈化技術(shù)去除蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)，隨后濃縮至所需體積，以提高檢測(cè)靈敏度。
液相色譜分離
·將處理后的樣品注入液相色譜系統(tǒng)，通過(guò)色譜柱（通常為反相柱）進(jìn)行分離。選擇合適的流動(dòng)相（如水和有機(jī)溶劑的混合物，可能包含酸或緩沖液以調(diào)節(jié)pH），以?xún)?yōu)化目標(biāo)激素的保留時(shí)間和分離效率。
質(zhì)譜檢測(cè)
·樣品經(jīng)色譜分離后，進(jìn)入串聯(lián)質(zhì)譜儀，首先通過(guò)電噴霧電離（ESI）轉(zhuǎn)化為帶電粒子。
·在第一級(jí)質(zhì)譜（MS1）中，根據(jù)m/z比篩選出目標(biāo)激素的母離子。
·母離子隨后在碰撞室中經(jīng)歷碰撞誘導(dǎo)解離（CID），生成一系列特征子離子。
·第二級(jí)質(zhì)譜（MS2）檢測(cè)這些子離子，通過(guò)比較母離子和子離子的m/z比，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)激素的高特異性識(shí)別。
數(shù)據(jù)分析
·使用專(zhuān)業(yè)軟件處理質(zhì)譜數(shù)據(jù)，基于保留時(shí)間和特征離子對(duì)匹配，確認(rèn)激素的種類(lèi)。
·通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)進(jìn)行比較，計(jì)算出樣品中激素的絕對(duì)或相對(duì)含量。
結(jié)果驗(yàn)證與報(bào)告
·分析結(jié)果應(yīng)通過(guò)平行實(shí)驗(yàn)或重復(fù)測(cè)量進(jìn)行驗(yàn)證，確保數(shù)據(jù)的可靠性和一致性。
·將所有檢測(cè)信息整理成報(bào)告，包括樣品信息、檢測(cè)方法、激素種類(lèi)、含量及其可能的生理意義。
樣本要求
采集的樣品，均應(yīng)在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行分析檢測(cè)，如不能及時(shí)分析檢測(cè)的則需要進(jìn)行處理和保存，一般應(yīng)遵循的原則是：環(huán)境干燥、溫度較低、避免光照、密封保存。
鮮樣：取樣后立即放入用于包裝樣本的鋁箔或冷凍保存管（提前進(jìn)行編號(hào)）并放入液氮速凍，-80℃超低溫冰箱保存，足量干冰郵寄運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融。
烘干樣：取樣后用柔軟濕布擦凈，不應(yīng)用水沖洗。盡快晾干并將樣品置于105?℃的烘箱中烘 15min以終止樣品中酶的活動(dòng)。經(jīng)過(guò)殺青之后，應(yīng)立即降低烘箱的溫度，維持在70 ～80℃，直到烘至恒重。若測(cè)定樣品中金屬元素的含量，應(yīng)注意金屬器械的污染問(wèn)題，以防干擾。
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