檢測原理
在LC-MS/MS分析中，樣品首先通過液相色譜系統(tǒng)進行分離，然后分離出的各個組分進入質(zhì)譜儀進行離子化和分析。質(zhì)譜儀通過檢測不同離子的質(zhì)荷比（m/z），生成質(zhì)譜圖，從而實現(xiàn)對動物性激素的定性和定量分析。
應用實例
進口食用動物性激素殘留量的測定：中國制定了SN/T 4744-2017標準，規(guī)定了進出口食用動物雄激素、孕激素和雌激素殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測方法。該方法適用于牛、羊、豬血清及尿中的多種動物性激素殘留量的測定。
農(nóng)業(yè)部1031號公告-1-2008：該標準規(guī)定了豬、牛、羊、雞肌肉和肝臟、牛奶和鮮蛋等動物源食品中11種性激素殘留檢測的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。該標準適用于這些食品中激素多殘留的確證和定量測定。
技術(shù)優(yōu)勢
高靈敏度和準確度：LC-MS/MS方法相比傳統(tǒng)的免疫測定方法，在低濃度下展現(xiàn)出更高的準確性和更低的變異性。這意味著即使在動物性激素含量非常低的情況下，也能夠進行精確的檢測。
良好的選擇性：LC-MS/MS能夠有效區(qū)分和檢測動物性激素與其他類似物質(zhì)，減少了交叉污染和假陽性的可能性。
寬線性范圍：LC-MS/MS方法通常具有較寬的線性范圍，能夠覆蓋不同濃度水平的動物性激素檢測需求。
低檢出限：LC-MS/MS方法的檢出限通常較低，能夠檢測到極低濃度的動物性激素，這對于確保食品安全和動物健康至關(guān)重要。
高通量分析：LC-MS/MS技術(shù)可以處理大量樣本，提高了檢測效率，特別適合于大規(guī)模樣品的篩查。
適用性廣：LC-MS/MS方法適用于各種動物源性食品中動物性激素的檢測，包括肉類、乳制品、蛋類等。
數(shù)據(jù)可靠性：LC-MS/MS方法提供的數(shù)據(jù)更加可靠，有助于科學家和監(jiān)管機構(gòu)做出更準確的判斷和決策。
流程概述
樣品采集與預處理：從動物（血液、尿液、組織等）或植物（如果研究攝入或吸收情況）中采集樣品。預處理步驟可能包括樣品勻漿、蛋白沉淀、提取和凈化，以去除干擾物質(zhì)并濃縮目標激素。提取通常使用有機溶劑，如乙醚、乙酸乙酯或含有少量酸或堿的有機溶劑，以促進激素的溶解和穩(wěn)定。
固相萃?。?/span>SPE）：使用固相萃取小柱對提取物進行進一步凈化，去除脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，提高目標激素的純度。不同的激素可能需要不同類型的小柱，如反相C18或C8小柱用于疏水性較強的激素，而HLB小柱則適合于親水性激素的凈化。
液相色譜分離：將凈化后的樣品注入液相色譜系統(tǒng)，通過選擇合適的色譜柱（如反相C18柱）和流動相（如水與甲醇或乙腈的混合物，可能添加少量酸或緩沖鹽以優(yōu)化pH值），實現(xiàn)激素的高效分離。
質(zhì)譜檢測：分離后的組分進入質(zhì)譜儀，通過電噴霧離子化（ESI）產(chǎn)生離子。在串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）模式下，選擇特定的母離子進行碰撞誘導裂解，生成特征性的子離子，從而實現(xiàn)高特異性定量。
數(shù)據(jù)處理與分析：使用專業(yè)軟件處理LC-MS/MS數(shù)據(jù)，根據(jù)保留時間、母離子和子離子信息，與標準品進行比較，進行定性和定量分析。內(nèi)標物的使用可以有效校正樣品制備和分析過程中的損失和變異，提高數(shù)據(jù)的準確性和可靠性。
結(jié)果驗證：通過分析標準曲線、空白樣品和質(zhì)量控制樣品，評估方法的線性范圍、檢出限、定量限、準確度和精密度，確保結(jié)果的科學性和有效性。
確保數(shù)據(jù)可靠
樣品前處理：樣品的正確處理對于減少基質(zhì)效應和離子抑制至關(guān)重要。這包括適當?shù)臉悠诽崛?、凈化和濃縮步驟，以確保分析物的純凈和穩(wěn)定。
儀器的選擇和維護：選擇高性能的LC-MS/MS設(shè)備，并定期進行維護和校準，以保持儀器的最佳運行狀態(tài)。這包括檢查和清潔色譜柱、離子源和探測器，以及確保氣體供應的純凈。
方法開發(fā)和優(yōu)化：開發(fā)適合特定分析物的LC-MS/MS方法，并進行充分的優(yōu)化，以提高分離效率和檢測靈敏度。這包括選擇合適的流動相、色譜柱和檢測器參數(shù)。
數(shù)據(jù)處理和分析：使用先進的數(shù)據(jù)處理軟件，對收集到的色譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行準確的處理和分析。這包括峰識別、基線校正、定量分析和統(tǒng)計分析等步驟。
質(zhì)量控制：實施嚴格的質(zhì)量控制措施，包括使用質(zhì)控樣品、內(nèi)部標準和外部標準，以及進行方法驗證，以確保數(shù)據(jù)的準確性和可比性。
實驗操作標準化：確保實驗操作的標準化，包括遵循標準操作程序（SOPs）、記錄實驗數(shù)據(jù)和結(jié)果，以及進行實驗復核，以減少人為錯誤和變異。
環(huán)境控制：控制實驗環(huán)境，如溫度、濕度和振動，以避免對分析結(jié)果產(chǎn)生不利影響。
優(yōu)化樣品前處理降低基質(zhì)干擾
樣品稀釋：對于基質(zhì)效應不大且不存在靈敏度問題的情況，可以通過稀釋樣品來降低基質(zhì)效應的影響。這種方法適用于簡單液體基質(zhì)，如尿液、淚液、腦脊液等。
蛋白質(zhì)沉淀法（PPT）：這種方法通過加入有機溶劑、酸堿鹽等溶劑沉淀去除生物樣品中大部分的蛋白質(zhì)，適用于幾乎任何極性的小分子化合物。
液-液萃取法（LLE）：利用目標分析物在互不相溶的溶劑之間的分配系數(shù)不同，將化合物從水相萃取到有機相。這種方法適用于離子型和非離子型化合物。
固相萃取法（SPE)：通過固體吸附劑吸附目標分析物，然后用適當?shù)娜軇┫疵?，適用于極性較小的化合物。
固相微萃?。?/span>SPME)：集采樣、萃取、濃縮、進樣于一體，適用于揮發(fā)性有機物、半揮發(fā)性有機物及不具揮發(fā)性的有機物。
消解法：通過化學反應破壞有機物，轉(zhuǎn)化為易于分析的形式。包括濕式消解法和干灰化法，適用于復雜樣品的處理。
衍生化：通過化學反應改變目標分析物的結(jié)構(gòu)，使其更易于檢測，適用于響應信號差或極性太強的化合物。
在線前處理技術(shù)：如在線固相萃?。?/span>SPE）、渦流色譜技術(shù)（TFC），這些技術(shù)可以快速、高效地處理樣品，減少基質(zhì)效應。
